大肠杆菌转化实验时的注意点
大肠杆菌转化实验时的注意点 | 时间: May-21 15:30:57 | 分类:技术栏目
凌仪生物提供高速离心机，美国Bio-rad伯乐电泳，德国eppendorf艾本德移液器，美国ABI基因扩增仪PCR，雅培原位杂交仪，Thermo热电离心机等实验室仪器设备，以及Corning康宁，Axygen爱思进，Greiner格瑞拉等耗材要省钱，别错过哦。有时候第一天涂的转化平板、次日早晨转化子可能长成的菌落比较大（1~2毫米以上，BL21就长得快），下一步转化子做质粒鉴定。这个情况下可以直接挑取一块菌苔（勿带出培养基），50微升酚/氯仿悬浮菌体，放置两分钟，加40微升TE抽提，上层TE吸出后再氯仿抽提一次，吸取上层TE即是质粒提取液。提取的质粒可以直接用于电泳和酶切。这样操作，可以省去转接液体试管的培养步骤，至少节省6~8小时的时间。但是，要在各步骤都控制得很好的情况下才能保证提取和酶切的效果，不同的实验室或者操作者未必能够很方便地重复。
转化时一定要做一个宿主菌的对照，即重组质粒涂板后再用宿主菌涂响应抗性的平板，以确定第二天长出来的克隆是否正确，我当时做了三次转化之后才发现不成功竟然是由于BL21可以在Amp（+）的平板上面生长。
